1? 材料與方法
1.1? 試劑與儀器
EGCG 原料藥(98%,酷爾化學(xué)科技(北京)有限 公司),EGCG 對(duì)照品(98%,北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù) 研究院商城分院,批號(hào):060509),β-LG(純度> 90%,上海源葉生物科技有限公司),(TritonX-100, 分析純天津市恒興化學(xué)試劑有限公司),甲醇(色譜 純),磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、冰乙酸、磷酸等試劑 均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。 DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司),AL204 電子天平(梅特勒— 托利多儀器(上海)有限公司),DP1100 高效液相色 譜儀(大連依利特分析儀器有限公司),WH-2 微型 渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠),HZ-9211K 恒 溫?fù)u床(太倉(cāng)華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),激光粒度 分析儀(ZetaPALS 美國(guó)布克海文儀器公司),Sino Chrome ODS-BP 色 譜 柱(C18 柱,250mm×4.6mm, 5μm)。
1.2? EGCG 含量測(cè)定方法的建立
色 譜 柱:C18 柱,5μm,4.6 mm×250 mm; 流動(dòng)相:甲醇 - 水 - 乙酸(30 ∶ 68 ∶ 2);流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;檢測(cè)波長(zhǎng) 276nm;進(jìn)樣量 20μL。精 密 稱 取 EGCG 對(duì) 照 品 25mg 于 25mL 容 量 瓶 中,配置為 1mg/mL 的 EGCG 母液,精密吸取 0.8mL、 1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、2.0mL EGCG 母 液 于 10mL 容量瓶中,配制一系列濃度的 EGCG 的對(duì) 照品溶液。以 EGCG 進(jìn)樣 濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)(X),峰面積(mV.sec)為 縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖 1),得回歸方程為 Y=33232X-540.66,R2 =0.996。 結(jié) 果 表 明,EGCG 在 0.08~0.20 mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
1.3? EGCG-β-LG 納米粒的制備
用磷酸鹽緩沖液配制一定濃度的 β-LG 溶液, 室溫下在搖床(200r/min)中過(guò)夜,使其充分溶解。 用 pH 為 2.5 的磷酸鹽緩沖液配制一定濃度的 EGCG 溶液。取 β-LG 溶液(9.5mL)水浴加熱 20min,然后 加入 0.5mLEGCG 溶液,快速渦旋混合 20s,并馬上置 于 25℃的水浴鍋中,冷卻 3h 即得。
2? 結(jié)果與分析
用 pH 為 6.5 的磷酸鹽緩沖液配制濃度為 3 mg/ mL 的 β-LG 溶液,室溫下?lián)u床(200 r/min)過(guò)夜,使 其充分溶解。用 pH 為 2.5 的磷酸鹽緩沖液配制濃度 為 0.8 mg/mL 的 EGCG 溶液,現(xiàn)配現(xiàn)用。取 β-LG 溶 液(9.5 mL)在溫度 75℃下水浴加熱 20 min 然后加 入 0.5mL 濃度為 0.8 mg/mLEGCG 溶液,快速渦旋混 合 20s,并馬上置于 25℃的水浴鍋中,冷卻 3h。即得 EGCG-β-LG 納米粒。固 定 β-LG 的 濃 度 為 3mg/mL,EGCG 濃 度 為 0.8mg/mL,緩沖液 pH 為 6.5,測(cè)量不同熱激溫度下的 包封率。
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