1 材料與方法
殼聚糖 (低分子量級) 購于美國 ALDRICH 公司;蠶繭購于杭州潤蚨蠶絲制品有限公司;冰 醋酸 (分析純級) 購于科龍化工有限公司;氯化 鈣 (分析純級) 與無水乙醇 (分析純級) 購于西 隴化工有限公司;戊巴比妥鈉購于美國 Sigma 公 司;SPF 級雄性 SD 大鼠 15 只,體重 220–250 g, 實驗動物由四川省實驗動物專業(yè)委員會養(yǎng)殖場 (許可證號:SCXK[川]2015-030) 提供,在中國 醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所動物實驗室進(jìn)行飼養(yǎng)及實 驗,實驗符合動物倫理學(xué)要求。全自動血細(xì)胞分析儀 (深圳邁瑞生物醫(yī)療電 子股份有限公司,型號 BC-3000)、磁力攪拌器 (鞏義市予華儀器有限公司,型號 DH-101S)、真空冷 凍干燥機 (德國 Christ 公司,型號 ALPHAl-4 LSC plus)、掃描電子顯微鏡 (荷蘭 FEI 公司,型號Quanta 250)、電子天平 (常熟市雙杰測試儀器廠, 型號 JJ223BC)、酶標(biāo)儀 (美國 Biotek 公司,型號: Eon)、離心機 (美國 Thermo Scientific 公司,型號: SORVALL)。
濃縮血小板由德陽血站提供符合國家獻(xiàn)血標(biāo) 準(zhǔn)的健康獻(xiàn)血者,按《血站技術(shù)操作規(guī)程》采 集全血 400 mL,采用富血小板血漿法制備濃縮血 小板 (PC,每袋 60–70 mL),質(zhì)量均符合《全血 及成分血質(zhì)量要求》 (GB 18469-2012)。每例 PC 取 20 mL 在 3 000 r/min 條件下離心 10 min, 取上層清液作為貧血小板血漿 (PPP),根據(jù)全自 動細(xì)胞計數(shù)儀測定的結(jié)果將 PC 用 PPP 調(diào)節(jié)至血 小板濃度為 500×109 個/L,制備得到富血小板血 漿 (PRP)。將 0.1 mol/L 的 CaCl2 溶液按照 1∶10 (V/V) 的比例加入到 PRP 中,激活 PRP。
2 結(jié)果與分析
敷料表面的微結(jié)構(gòu) (如孔隙率、孔隙分布等)會影響材料吸收傷口血量以及 PRP 中生長因 子的釋放速度。敷料的吸水性能與支架的親水性緊密相關(guān), 屬于止血材料的物理特性之一。當(dāng)材料按壓在傷 口上時,吸水性強的材料會吸收血液中的水分, 導(dǎo)致血液黏度增加從而促進(jìn)血小板聚集,實現(xiàn)血 液凝固。
3 結(jié)論
在純殼聚糖敷料中加入 PRP 后雖不會明顯改 善敷料的孔隙結(jié)構(gòu)與吸水性,但體外全血凝血實 驗與大鼠體內(nèi)止血實驗結(jié)果均顯示會提高殼聚糖 敷料的止血性能。在 PRP 殼聚糖敷料中繼續(xù)引入 絲素蛋白,并且在殼聚糖溶液與絲素蛋白溶液的 體積配比為 1∶1 時,敷料具有致密的孔隙結(jié)構(gòu)與 較高的吸水性,體外全血凝血實驗與大鼠體內(nèi)止 血實驗也證明此比例敷料與其余幾組敷料相比, 具有更好的止血性。
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