檢測 ZEN 比較常用的方法有薄層色譜、 高 效液相色譜 (HPLC) 等儀器分析方法, 以及 ELISA、 免疫層析等免疫學(xué)檢測方法。 儀器分析靈敏度雖高, 但成本高、 操作復(fù)雜, 不適合現(xiàn)場快速檢測。 免疫學(xué) 方法尤其是免疫層析檢測方法因快速簡便, 特異性強 等優(yōu)點在快速篩查和檢測領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。 隨著檢測需求的提升, 傳統(tǒng)免疫層析方法的靈 敏度已經(jīng)無法滿足檢測需求, 一些新型標記材料陸續(xù)出現(xiàn), 量子點 ( quantum dots, QDs) 靈敏度高、 發(fā) 光穩(wěn)定、 不易分解, 與免疫層析技術(shù)結(jié)合后, 既可以 提高檢測靈敏度, 又能進行定量檢測。免疫熒光讀數(shù)儀購自 QIAGEN 公司; ZF7 三用紫 外分析儀購自鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司; 多功能 冷凍離心機購自 Sigma 公司。
基于優(yōu)化后的反應(yīng)體系組裝的熒光免疫層析試紙 條檢測玉米樣品中 ZEN。 線性回歸 方程為 y = - 0. 532 5x + 0. 937 2, 根據(jù)回歸方程計算 IC50為 6. 6 ng / mL, 檢測范圍為 1. 2 ~ 37. 3 ng / mL, 檢 測靈敏度為 1. 2 ng / mL。靜電吸附和共價偶聯(lián)是 QDs 與生物分子連接的 2 種方式。 本試驗采用水溶性羧基修飾的量子點 標記 ZEN 單克隆抗體制備熒光免疫探針, 免疫探針 的質(zhì)量直接影響免疫層析試紙的靈敏度及穩(wěn)定性, 因 此本試驗對熒光免疫探針的制備過程進行了系統(tǒng)的優(yōu) 化。 分別優(yōu)化了 EDC、 NHS 的加入量、 抗體的投入 量以及熒光免疫探針的重懸緩沖體系等, 并利用免疫 層析試紙系統(tǒng)對熒光免疫探針優(yōu)化結(jié)果進行判定, 利 用試紙系統(tǒng)選擇的熒光免疫探針制備條件將更適合熒 光免疫層析試紙的建立。